Oeuvre lengkap beliau termasuk lebih 700 jilid dengan lebih daripada 150,000 muka surat.[14][15] Satu senarai lengkap karya-karya beliau boleh didapati di laman web Muzium Manga Tezuka Osamu.[16]

Ketika masih muda, lengan Tezuka bengkak dan dia jatuh sakit. Beliau telah dirawat dan sembuh oleh doktor, yang menjadikan beliau mahu menjadi doktor. Bagaimanapun, beliau memulakan kerjaya sebagai artis manga manakala seorang pelajar universiti, lukisan kerja pertamanya profesional di sekolah. Pada titik persimpangan, dia bertanya kepada ibunya sama ada beliau harus melihat ke dalam melakukan manga sepenuh masa atau sama ada dia perlu menjadi seorang doktor. Pada masa itu, yang merupakan seorang pengarang manga bukan satu kerja terutamanya bermanfaat. Jawapan ibunya berikan adalah: "Anda harus bekerja melakukan perkara yang anda suka yang paling penting." Tezuka memutuskan untuk mengabdikan diri kepada penciptaan manga secara sepenuh masa. Beliau berkelulusan dari Universiti Osaka dan mendapat ijazah perubatan, tetapi beliau kemudiannya akan menggunakan pengetahuan perubatan dan saintifik untuk menambahkan kekayaann sci-fi manga beliau, seperti Black Jack.[15][17]

Ciptaan Tezuka termasuk Astro Boy (Mighty Atom in Japan), Black Jack, Princess Knight, Phoenix (Hi no Tori in Japan), Kimba the White Lion (Jungle Emperor in Japan), Unico, Message to Adolf, The Amazing 3 dan Buddha. "Karya hidup" beliau adalah Phoenix — kisah hidup dan mati beliau bermula pada tahun 1950-an dan berterusan sehingga kematiannya.[18]

Pada bulan Januari 1965, Tezuka menerima surat daripada pengarah filem Amerika Stanley Kubrick, yang telah menonton Astro Boy dan mahu menjemput Tezuka sebagai pengarah seni filem wakilnya, 2001: A Space Odyssey (1968). Walaupun teruja dengan jemputan Kubrick, Tezuka tidak mampu untuk meninggalkan studio untuk suatu tahun tinggal di England, jadi dia terpaksa menolaknya. Walaupun dia tidak dapat bekerja di atasnya, dia suka filem itu, dan akan memainkan runut bunyi pada jumlah maksimum dalam studio untuk memastikan dia terjaga pada malam-malam panjang kerja.[19][20]

Ramai artis manga muda pernah tinggal di apartmen di mana Tezuka tinggal, Tokiwa-sō. Penduduk termasuk Shotaro Ishinomori, Fujio Akatsuka, dan Abiko Motou dan Hiroshi Fujimoto (yang bekerja bersama-sama di bawah nama pena Fujiko Fujio).[21][22]